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气液界面培养人支气管上皮细胞的关键点

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发表于 2013-10-16 14:36:38 | 显示全部楼层 |阅读模式
描述:
应用气液界面(Air Liquid Interface, ALI)培养法配合适当的培养基,如PneumaCult™-ALI(Catalog  #05001)可成功实现人原代支气管上皮细胞(HBECs)向具有生理性相关表型细胞的分化。以下内容我们会列出使用PneumaCult™-ALI获得完全分化的假复层黏膜纤毛上皮细胞所需要注意的关键点。

在铺入细胞培养小室前,细胞先在培养瓶中以浸没式培养:
• 起始细胞要选择活性较好的细胞。已传代3代以上的细胞适合ALI培养,但分化成纤毛细胞和粘液分泌细胞则从第4代就减弱了。
• 当细胞以浸没式培养汇合接近80%,将原先的培养基更换为PneumaCult™-ALI诱导培养基并孵育过夜(诱导阶段)。请注意,如果细胞在更换PneumaCult™-ALI诱导培养基孵育过程之前已100%汇合超过24小时,可能会对细胞的分化潜能产生负面影响。

PneumaCult™-ALI诱导阶段:
• 将细胞铺入培养小室前,HBECs必需在PneumaCult™-ALI诱导培养基中过夜培养。
• 为确保细胞贴壁,在接种细胞前,培养小室必需用胶原蛋白I包被。使用0.03 mg/mL的胶原蛋白溶液,37°C孵育过夜。任何时候都不要让包被小室的胶原蛋白溶液变干。
• 我们推荐使用胶原蛋白溶液Collagen Solution (Catalog  #04902),包被小室前需将其稀释到推荐的最终浓度。若使用其他厂商的胶原蛋白溶液,请按照该产品说明准备。

PneumaCult™-ALI扩增阶段:
• 在HBECs汇合后,将培养基更换为PneumaCult™-ALI 扩增培养基,继续培养 。HBECs细胞应覆盖细胞培养小室的全部面积,包括小室边缘。请注意,一些供体细胞群在扩增阶段需要较长的扩增时间达到细胞的汇合。细胞培养保持汇合状态最多可达3天。
• 我们推荐使用微孔直径为0.4 微米的透明PET小室(如BD Biosciences Catalog #353180)。这种透明的细胞培养小室便于观察所培养细胞的分化迹象。由于一些细胞培养小室可能不支持细胞的粘附或完全分化,因此培养小室的选择非常重要。欲了解本实验室已测试过的细胞培养小室信息,请联系技术支持
PneumaCult™-ALI 实验步骤示意图如下:





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